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核酸检测PCR实验室建设要点:通常PCR实验室没有严格的净化要求,需根据实验内容确定实验室洁净度。当PCR实验样品需要保护时,实验室应设洁净空调系统。对于2019-nCoV核酸检测实验室,建议设置10万级净化。
气流组织宜采用上送下排,送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到较小程度。在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口过滤器排风口应设在室内被污染风险高的区域,单向布置,不得有障碍;不能以回(排)风夹墙代替排风直管,排风过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。
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PCR实验室各区功能及主要设备:试剂准备区:主要进行试剂的制备,分装和主反应混合液的制备。试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。
样品制备区:主要进行样品的保存,核酸提取,贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。 本区主要设备有冰箱,生物安全柜,离心机,加样器,振荡器等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染,压力一般设计为+10Pa。
扩增区:主要进行DNA扩增项目。已制备的DNA模板(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:冰箱,加样器,离心机,扩增仪等。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶从本区漏出,压力一般设计为-25Pa。
扩增产物分析区:主要进行扩增产物的测定。本区主要设备有加样器,、和水浴箱等。本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域,压力一般设计为-25Pa。
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PCR实验室各区域仪器设备配备通常如下:
(1)标准的PCR实验室试剂准备区: 仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。
(2)标准的PCR实验室标本制备区仪器设备主要应有生物安全柜(尽量为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果。此外还应配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设备(水浴和/或干浴仪)、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。
(3)标准的PCR实验室扩增区主要仪器就是核酸扩增热循环仪(PCR仪,实时荧光或普通的)。热循环仪的电源应,并配备一个稳压电源或UPS,以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外,根据工作需要,还可配备加样器、超净台等。
(4)标准的PCR实验室产物分析区:本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪(槽)、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、和等。在理想情况下,PCR实验室试剂准备、标本制备、扩增三个区域可设置缓冲间。在缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内
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