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系统按以下步骤获取样品的荧光量子产率:步,利用罗丹明B量子计数器和标准钨灯光源对荧光分光光度计进行光谱校正;第二步,分别将空白样品和荧光样品置入积分球内部样品池中,测量包含激发瑞利散射光谱在内的空白样品和荧光样品的发射光谱;第三步,利用荧光量子产率分析软件自动计算样品的荧光量子产率数据。
仪器的光路设计
系统光路示意图如图3所示。系统光源选用氙灯,氙灯发出的复合光经过激发单色器分光后形成单色光,单色光照射到样品表面,样品的散射光以及被激发出的荧光在积分球内部进行多次反射和累积,累积后发射光经过发射单色器分光后到达光电倍增管探测器,被探测器接收。激发单色器和发射单色器分光系统均采用凹面光栅形式。样品置于积分球内部,由样品位置反射或发射出的各种光,积分球都对其进行收集和累积,因此,具备了直接计算荧光量子产率的基础。
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激发光谱校正
仪器的激发光谱能量在不同波长下并不是一个恒定值,而是受到光源和激发单色器等的影响,有一个分布特征曲线。只有消除了这个曲线的影响,才能得到物质本身的真实激发光谱。
式中:Sex(λ)为物质的真实激发光谱; S ′ ex Sex′ (λ)为物质的未校正激发光谱;G(λ)为仪器激发光谱综合响应特征系数。
对激发光谱进行校正就是要得到G(λ)系数[11]。罗丹明B量子计数器标准溶液在激发波长250~600 nm波长范围内具有吸收恒定、量子产率不随波长变化,激发光谱为水平直线的特性[11],如图4所示。将罗丹明B量子计数器放入测量光路中,如图5所示。仪器发射波长固定在640 nm,执行250~600 nm的激发光谱扫描,此时得到的激发光谱便是G(λ)。
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对于600 nm以上的波长范围,通过已知色温数据的标准钨灯光源作为黑体来求得发射光谱校正曲线[12],如图7所示。校正方法是将标定过色温数据的钨灯放入样品室,调整标准电源达到标准钨灯的标定电流工作模式,使标准钨灯达到已知的色温状态。仪器执行发射波长扫描,扫描波长范围为600~900 nm。此时得到的光谱为W(λ)。这样就可以获得600~900 nm仪器发射光谱综合响应特征系数M(λ600~900),即式中:M(λ600~900)为600~900 nm仪器发射光谱综合响应特征系数;W(λ)为600~900 nm发射波长扫描光谱;H(λ,T)为色温T时的黑体辐射曲线;T为标准钨灯的色温。
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光致发光荧光量子检测系统是用来干什么的?光致发光荧光量子检测系统是一种用于化学、生物技术以及药学领域的分析仪器,主要作用是进行无损快速定量定性定位分析。它利用光的激发使被测样品发出可见或近红外光谱的发射信号(即萤光线),通过光电倍增管等光学传感器和电子部件将此微弱的光电信号收集并放大传输至计算机进行处理识别的一种高科技产品。该设备具有灵敏度高、操作简单方便等特点,可广泛应用于生命科学、研究、环保监测等多个领域中。
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