酶联斑点图像分析仪选型
德国bio-sys品牌bioreader
酶联斑点图像分析仪特点:
可检测普通酶联免yi斑点,还可进行病毒噬斑/空斑等检测;
适用板型6/12/24/48/384孔板和培养皿等
光照调节:自动光照调节,可自动获取各种微孔板的图像;
综合质量控制模块,提供符合GLP规范的标准板,并能够使用标准板进行系统自动校验,保证斑点判读标准的一致性
统计学插件:统计分析各孔斑点分布情况、抗原刺激情况、细胞因字分泌情况等
至少包含酶联斑点分析、病毒噬斑等的检测分析功能,符合数据的采集和分析的规范。软件包含触控操作功能;一体化软件,在同一软件中,可同步完成斑点图像扫描、斑点计数与数据分析。
成熟文献1000+,国内使用的近百家。
BIOREADER 4000 E y厂家原理BIOREADER 4000 E y厂家原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养,在有刺激的条件下,细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后,被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识,其后再与酶标记的亲和素作用,并加入底物使其呈色,有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有(或不含)刺激物中培养;
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被Antibody捕获;
3. 移出细胞,清洗板子,加入生物素标记的检测Antibody,形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构;
4. 为了观察膜上斑点的形成,加入酶标记的亲和素;
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;
6. 斑点计数(可用bioreader自动读板仪计数),数据处理,结果分析。
03BIOREADER 4000 E y厂家免疫学基础研究
根据检测的细胞因子的不同,ELISPOT可以用来区分被activation的不同的T细胞亚群。例如Th1细胞主要分泌IFN-γ,IL-2和TNF-α,而其他一些细胞因子如IL-4,IL-5和IL-13一般是由Th2细胞分泌的。在过敏研究中的一个热点就是采用ELISPOT测定Th2型细胞因子,因为Th2反应是过敏的主要反应,但通常都是低频率岀现,需要高度灵敏方法才能被成功检测到。
04过敏研究
在针对特异反应性过敏的免疫treat中监测T细胞免疫反应;在细胞介导的接触过敏的体外检测诊断的应用中,ELISPOT方法受到越来越多过敏工作者的关注。因为对于像Th2型反应主要细胞因子IL-4这样的一贯很难通过其他方法如 flow cytometry和ELISA检测到的因子来说,应用高灵敏度的ELISPOT方法对于研究过敏原特异性免疫反应显得尤为重要。
BIOREADER 4000 E y厂家(ELISPOT)的原理是什么呢BIOREADER 4000 E y厂家(ELISPOT)的原理是什么呢
(一)原理:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后,再与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
(二)ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应,在Microplate reader上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万~30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb,在研究者以刺激剂activation细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。